人ELISA檢測試劑盒試驗操作程序檢驗結(jié)果
人ELISA檢測試劑盒樣本要求
人ELISA檢測試劑盒樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
人ELISA檢測試劑盒操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
5、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
8、如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL,在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度(OD值)。