大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒固體樣本處理原則操作流程
大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的緩沖液溶解，蛋白可以直接離心取上清檢測(cè)，細(xì)胞內(nèi)的蛋白，要先收集細(xì)胞，再用破碎，離心取上清。
1、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè)，其余冷凍備用，保存中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨；
2、大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測(cè)蛋白不是蛋白，而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白，這個(gè)時(shí)候，要先收集細(xì)胞，洗滌干凈，再破碎細(xì)胞，離心取上清。
大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒操作流程如下：
?。?）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
?。?）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
?。?）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
?。?）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
?。?0）每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
?。?1）每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。
?。?2）分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
?。?3）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
在線客服
電話咨詢
